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Cours, invasion tumorale

TD : Cours, invasion tumorale. Recherche parmi 297 000+ dissertations

Par   •  7 Décembre 2016  •  TD  •  1 557 Mots (7 Pages)  •  728 Vues

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 TD n°12 : invasion tumorale

1ère étape : prolifération/ division cellulaire

la cellule tumorale perte la capacité de proliférer normalement du à des facteurs de croissance.

Cellule pendant la mitose : fuseau mitotique, réseau des microtubules

les premières drogues cancéreuses utiliser en chimiothérapie sont des drogues qui cibles la tubulines pour bloquer la division (tous est une question de dosage).

→ fonction des microtubules :dynamismes ils s'allongent et se rétrécissent, le MT est très dynamique si on bloque le dynamisme on bloque la division, on peut augmenter la polymérisation et bloquer la division, quelques soit la façon dont on va jouer avec les MT dès qu'on a un déséquilibre on va bloquer la division. (qu'on active ou inhibe la polymérisation = bloquer la division).

Paclitaxel est un dérivée du taxol (= drogue issu de l'if), il va avoir tendance à stabiliser les MT, il stimule la polymérisation et bloquer la division.

Exemple de drogue qui inhibe la polymérisation : vinca alkaloides : vinblastine et colchicine.

La radiothérapie à une action qui permet de tuer la cellule alors que la radiothérapie va cibler les cellules.

Modes d'action des anticancéreux :

  1. La cholcinine s'intercale vers  l'extérieur du tube de la tubuline
  2. le taxol s'intercale vers la face interne du tube
  3. vinblastine va s'associer sur l'extrémité plus du MT

Tubuline doit être tagué avec un fluorochrome, on va avec un video-microscope photographier les MT de la cellule à différent temps et suivre l'évolution de leurs tailles.

On voit des mouvements de MT  dans la cellule mais au niveau des extrémités ils sont figées donc  ça ne s'allonge plus ni se rétrécie → rôle du paclitaxel.

2ème étape : transition épithélio-mésenchymateuse

Dysplasie : changement morphologique de la cellule

→ quelles techniques permettent l'étude de l'expression d'un récepteur de surface ?

 Citez 3 techniques différentes :

  1. western blot = migration de cellules pour les séparer selon leur poids moléculaires, on peut venir avec un AC, pour visualiser les molécules avec un substrat colorer ou un substrat qui émet de la lumière.
  2. Immunofluorescence : on cultive des cellules sur une lamelle de verre, on les fixe et détecte les protéines avec des AC
  3. RT-PCR : on part de l'ARNm on fait une réverce transcription pour obtenir un ADNc et on fait une PCR sur cette ADNc (on peut avoir une PCR quantitave ou qualitative)

Analyse 1 :  

  • Pc3 : lignée de cancer de la prostate
  • A549 : lignée de cancer pulmonaire
  • FN = fibronectine
  • N-cad : s'exprime sur des cellules qui ne sont pas épithéliales comme les E-cadhérines
  • Tubuline : témoin de charge

observations :  

  • condition expérimentales : on va visualiser des extraits de cellules qui ont été incubée ou non avec EGF (= facteurs de croissance)
  • le but de l'expérience : regarder un certains nombres d'expressions des protéines dans des cellules tumorales lorsqu'on traite les cellules avec EGF ou pas, on regarde un marqueur épithéliale (E-cad)  et deux marqueurs mésenchymateux (N-cad et FN)
  • analyse : on voit qu'on a une diminution de la E- cad qui est plus marque sur PC-3, augmentation de la FN pour les deux lignée
  • conclusion : nos cellules qui sont plutôt épithéliales vont devenir mésenchymateuses, ces cellules tumorales vont rentrer dans une transition  épithéliale-mésenchymateuse en présence de l'EGF
  • le fibroblaste va produire la fibronectine qui est présente dans la matrice extracellulaire
  • Les cellules mésenchymateuses ne sont  pas dans le tissus épithéliale, on a des cellules épithéliales qui peuvent devenir mésenchymateuse (dans certains cas de cancer)

Expérience d'immunofluorescnence : diminution de la E-cadhérine et une augmentation de la FN et N-cad

on voit une localisation en immunofluorescence mais pas dans le western blot

mais le western blot est plus quantitative et on peut voir si y a une différence de la structure de la protéine = taille

Expérience RT-PCR : même résulta que le western blot, on voit les messagers qui agissent sur la transcription

Quel type de molécule pourrait moduler l'expression de la E-cadhérine ?

→ Le facteur de transcription va induire ou inhiber le messager donc on aura pas de protéine

3ème étape : invasion cellulaire

Analyse 2 : invasion en gel 3D

l'invasion tumorale regroupe : la capaciter de la cellule à dégrader la matrice extracellulaire et sa capicité à se déplacer

Invasion cellulaire in vitro : on place des cellules tumorales sur un gel, elles vont former une couche cellulaire, et après une nuit on va visualiser les cellules qui se sont décrochées et qui ont envahie le gel.

Le gel de collagène est un enchevêtrement de protéine

Le collagène est très dense en microscopie électronique permet de visualiser l'épaisseur

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