Tp Lipide

BUT

L’objectif de ce TP est de caractériser la composition lipidique d’un jaune d’œuf lyophilisé ; dans un premier temps, en séparant les lipides des autres molécules biologiques entrant dans la composition du jaune d’œuf. Cette extraction est basée sur leur différence de solubilité. Effectivement les lipides sont solubles uniquement dans les solvants organiques apolaires et les autres molécules dans les solvants polaires. Dans second temps, les composants lipidiques du jaune d’œuf seront caractérisés par succession de deux chromatographies sur couche mince.

PRINCIPE

L’Extraction des lipides repose sur le fait qu’ils soient solubles dans les solvants apolaires, alors que les autres constituants du jaune d’œuf comme les protéines, glucides, sont miscibles dans les solvants polaires. Ainsi l’usage d’un solvant organique apolaire, ici un mélange chloroforme/méthanol (2 :1) permet de solubiliser les lipides, et donc de les séparer des autres molécules biologiques polaires non miscibles avec ce solvant. Ainsi, dans le tube à hémolyse, il y a formation d’un surnageant composé de lipides solubilisés dans le solvant, et un culot formé des molécules subsistantes.

Il est important d’utiliser un jaune d’œuf lyophilisé, c’est-à-dire sans eau, afin d’éviter tout risque d’interaction polaire entre les composé lipidiques et l’eau. C’est aussi pour cela que la verrerie doit être totalement sèche. Ainsi l’extraction pourra se faire dans de bonnes conditions.

D’autre part la méthode de chromatographie sur couche mince utilisée dans ce TP, est une chromatographie d’adsorption. Son principe est basé sur la séparation de composé chimique en fonction de leur polarité, et donc de leur affinité pour l’une des deux phases composant la chromatographie. D’une part la phase mobile constituée d’un solvant apolaire a pour but de faire migrer par capillarité les différents solutés : les solutés les plus apolaires migreront plus haut que les solutés polaires. Ensuite, une plaque de silice consiste en la phase stationnaire de la chromatographie : elle est absorbante et polaire ; elle retient donc les composants polaires. Enfin une coloration permet l’identification des tâches après migration.

RESULTAT

Afin de déterminer la composition du jaune d’œuf en lipide grâce à la chromatographie sur couche mince, on va comparer la migration des deux dépôts de jaune d’œuf avec les différents lipides témoins. Pour ceci on utilise le rapport frontal obtenu à l’aide du rapport entre la distance d (distance entre le milieu de la tâche et ligne de dépôt) et la distance D (distance entre la ligne de dépôt et le front de l’éluant).

En ce qui concerne la chromatographie de la grande plaque et du solvant apolaire composé de chloroforme et méthanol nous pouvons interpréter les résultats suivant :

On réalise deux dépôts de surnageant d’extrait de jaune d’œuf sur la plaque de silice, le premier dépôt résulte de deux poses de produit au lieu de cinq pour le second. Ainsi on peut déterminer,

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