Exemple rapport de stage BTS BTK

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Rapport de stage

   Etude de l’effet du microARN mir-451 sur l’initiation de la traduction dirigée par l’ IRES (Internal  Ribosome Entry Site) du virus de l’HépatiteC

Liste des abréviations

ADN : Acide DésoxyRibonucléique

ADNpol : Acide DésoxyRibonucléique polymérase

ARN : Acide RiboNucléique

ARNm : Acide RiboNucléique messager

CIRI : Centre International de Recherche en Infectiologie

dNTP : Désoxyribonucléotide TriPhosphate

DTT : Dithiothréitol

ENS : Ecole Normale Supérieure

INSERM : Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale

IRES : Internal Ribosome Entry Site = Site d'entrée ribosome interne

KAc : acétate de potassium

PCR : Polymerase Chain Reaction - Réaction en chaîne de polymérase

SIV : Simian Immunodeficiency Virus = Virus de l’Immunodéficience Simienne (VIS)

TEV : Traduction Eucaryote et Virale

UTR : Untranslated Region = Région non traduite

URRL : Untreated Rabbit Reticulocyte Lysate = Lysat non traité de réticulocytes de lapin

VIH-1 : Virus de l'Immunodéficience Humaine 1

VIH-2 : Virus de l'Immunodéficience Humaine 2

VHC : Virus Hépatite C

WG : Wheat Germ – Lysat de germe de blé

Contenu

Remerciements        

Liste des abréviations        

Contenu        

Introduction        

1/ Présentation du Laboratoire        

2/ La transcription eucaryote        

3/ La Traduction Eucaryote        

4/ Traduction du Virus de l’Hépatite C (VHC)        

Objectif du stage        

Conclusion personnelle        

Introduction

1/ Présentation du Laboratoire

J’ai effectué mon stage dans un laboratoire du Centre International de Recherche en Infectiologie (CIRI) dirigé par le Docteur François-Loïc COSSET et situé dans les locaux de l’Ecole Normale Supérieure (ENS). Le CIRI est l’unité U1111 de l’Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) J’ai intégré l’équipe Traduction Eucaryote et Virale (TEV) dirigée par le Docteur Théophile OHLMANN.  

Leurs principales découvertes sont :

-L’Identification de séquences IRES (Internal Ribosome Entry Site) chez les lentivirus (VIH-1, VIH-2, SIV)

-L’Elaboration de systèmes de traduction in vitro

-L’inhibition traductionnelle par les miARNs cible l’étape de balayage du ribosome

-L’importance de l’ARN hélicase DDX3 dans la traduction de l’ARNg du VIH-1 et du VIH-2

 Actuellement l’équipe travaille sur différents thèmes de recherche :

-L’étude du mécanisme moléculaire de l’activité des miARN sur la traduction du VHC

-La conception d’un système de traduction in vitro pour l’étude des cycles viraux

-La traduction et de la localisation du VIH-1 et VIH-2 ARN génomiques

-La recherche de mutations/délétions qui affectent l’efficacité traductionnelle chez les patients infectés par le VIH-1

2/ La transcription eucaryote

La transcription est le processus de copie du matériel génétique (ADN) en ARN et se déroule dans le noyau. L’ADN est partiellement transcrit, seules les régions codantes des gènes sont transformées en ARN. L’enzyme qui active cette réaction de transcription est appelée ARN polymérase.

La transcription nécessite deux phases : la formation d'un ARN pré-messager puis la maturation de pour former un ou plusieurs ARN messagers (ARNm) qui seront par la suite traduit.

En amont de la séquence codante il existe des régions régulatrices, ou régions promotrices, qui permettent le recrutement de l’ADNpol2. L’ADNpol2 a besoin de co-facteurs afin de reconnaître les régions promotrices et d’initier la transcription. Ces facteurs forment un complexe protéique constitué de 8 à 14 sous unités. Une fois le complexe d’initiation en place, les deux brins d’ADN peuvent alors s’ouvrir et se dérouler, formant une boucle de transcription et libérant ainsi le brin transcrit aussi appelé brin matrice.

La boucle de transcription se déplace dans le sens 3’-5’ de l’ADN et la chaîne d’ARNm s’allonge dans le sens 5’-3’. L’ARNpol2 déchiffre le brin matrice à l’aide des facteurs d’élongation permettant son déplacement. Les bases complémentaires s’associent et les ribonucléotides (Adénine, Cytosine, Guanine et Uracile à la place de la Thymine.) s’ajoutent au fur et à mesure.

Pour achever la phase de transcription, l’ARN pol 2 possède également des facteurs protéiques de terminaison capables de reconnaître les séquences sur le brin d’ADN servant de matrice qui permettent l’arrêt du processus. La transcription terminée, l’ARN pré-messager est alors libéré.

L’ARN pré messager issu de la transciption subit encore des modifications sur ses deux extrémités. La méthyl-guanosine triphosphate s’ajoute à l’extrémité 5’. Elle constitue la coiffe de l’ARNm et est nécessaire à la reconnaissance par les ribosomes lors de la phase de traduction.

A l’extrémité 3’, c’est la poly A Polymérase qui ajoute jusqu’à 200 Adénines (ou queue poly-A) chez les eucaryotes assurant aini la stabilité de l’ARN.

L’ARN obtenu va encore subir une dernière transformation avant la traduction. En effet, l’ARN pré messager copie la séquence du gène.  eucaryotesUn complexe nucléoprotéique différencie les exonns des introns et élimine ces derniers, et réunit les exons restants les uns aux autres’est ’épissage (qui peut aussi être alternatif avec sélection et conservation de certains exons).L’ARN pré messager devenu messager au terme de la maturation, peut être .  

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