Extraction des lipides du jaune d’œuf :

Extraction des lipides du jaune d’œuf :

Le but de ce TP est d’extraire les constituants lipidiques du jaune d’œuf et de les caractériser.

Nous avons utilisé deux méthodes lors de ce TP :

• L’extraction des lipides du jaune d’œuf lyophilisé :

Pour cela nous avons incorporé le jaune d’œuf dans un mélange de chloroforme et méthanol et passé le tout au vortex.

• Deux chromatographies sur couche mince (CCM) :

La  chromatographie sur couche mince est une chromatographie d’adsorption, son principe repose sur l’utilisation de deux phases : une phase stationnaire polaire qui est un adsorbant solide (gel de silice), et une phase mobile apolaire qui est le solvant. Cette méthode est couramment utilisée pour séparer des composants dans un but d'analyse

Notre premier solvant (composé d’hexane, d’éther diéthylique et d’acide acétique) était moins polaire que le deuxième solvant (composé de dichlorométhane, de méthanol et d’eau). En effet la présence de l’eau qui est une molécule polaire rend le deuxième solvant plus polaire, donc les molécules qui migreront le plus seront les molécules les moins polaires.  

Deux chromatographies avec des solvants différents sont réalisées pour que des produits qui ont plus d’affinité avec un solvant plus ou moins polaire puissent mieux migrer dans l’un ou l’autre des solvants, La deuxième nous permettra aussi de confirmer ou non nos résultats de la première chromatographie.

Résultats :

Pour connaître les constituants lipidiques du jaune d’œuf on calcule les différentes références frontales des produits, si deux produits ont la même référence frontale (Rf) c’est qu’ils sont composés du même lipide.

Le calcul des références frontales est le suivant : Rf = d / D

d = distance entre la ligne de dépôts et le centre de la tâche (en cm).

D = distance entre la ligne de dépôts et la ligne de front de solvant (en cm).

Pour la première chromatographie, voici les différents produits que nous avons déposés :

1. Acide gras (2 dépôts)
2. Monoacylglycerol (4 dépôts)
3. 1.3 Diacylglycerol (4 dépôts)
4. 1.2 Diacylglycerol (4 dépôts)
5. Triacylglycerol (4 dépôts)
6. Extrait du jaune d’œuf (2 dépôts)
7. Extrait du jaune d’œuf (10 dépôts)
8. Cholestérol (8 dépôts)
9. 1.3 Diacylglycerol (2 dépôts) + 1.2 Diacylglycerol (2 dépôts)
10. 1.3 Diacylglycerol (2 dépôts) + 1.2 Diacylglycerol (2 dépôts) + cholesterol (8 dpôts)
11. Ester de cholestérol (4 dépôts)
12. Phosphatidylcholine (16 dépôts)
13. Phosphatidyléthanolamine (8 dépôts)

Sur cette chromatographie, D = 7,5 cm

On remarque que les dépôts 6 et 7 sont identiques et ne changent qu’en concentration. Mais aussi que les dépôts 9 et 10 sont constitués de différents lipides mélangés, ces dépôts sont effectués pour vérifier que certains lipides n’est pas d’effets sur la migration d’autres lipides lorsqu’ils sont ensemble.

Grâce aux résultats nous pouvons déterminer les lipides présents dans le jaune d’œuf en comparant les références frontales de leurs dépôts (6 et 7) avec celles des autres lipides. Pour les dépôts 6 et 7 il y a 5 tâches différentes ; la première tâche se situe à 0 cm (elle n’a donc pas migré), on observe aussi cette tâche dans les dépôts 2, 12 et 13 ce qui veut donc dire que le monoacylglycerol, la phosphatidylcholine et la phosphatidyléthanolamine sont présents dans le jaune d’œuf.

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