TP Hémolyse

TP Hémolyse

Nous avons a disposition des hématies de rats et nous voulons étudier leurs comportements dans différentes conditions. Pour ce faire on a préparer plusieurs solutions, certaines avec une osmolarité différente de nos hématies et d'autres avec la même osmolarité mais avec une composition chimique différente et on observera leur comportement une fois plongées dans nos solutions.

Nous pourrons ainsi comprendre et expliquer l'isoosmolarité et l'isotonicité d'une solution ainsi que la résistance globulaire

Afin de réaliser nos manipulations, nous avons a disposition :

• Des hématies de rat en suspension dans su sérum physiologique stérile
• Une solution mère de NaCl a 12‰
• Une solution de glucose à 5,5%
• Une solution d'urée isoosmotique au plasma
• Une solution de glycérol isoosmotique au plasma
• Des tubes à essais
• Des tubes à hémolyse
• Des pipettes graduées
• Une pipette pasteur
• Des lames et lamelles de verres

Notre première solution sera du sérum physiologique, elle nous servira de témoin pour les autres solutions en représentant les conditions similaires à celles du plasma

 Nous avons a notre disposition une solution mère de NaCl a 12‰ et nous voulons 3 dilutions a 9‰  , 6‰  , et 3‰ et chacune doit faire 8mL.

On prend donc deux tubes a essais que l'on va remplir l'un avec de l'eau déminéralisée, l'autre avec la solution de NaCl 12‰

afin de savoir combien de mL on doit prélever pour faire notre solution, on va utiliser la formule de dilution

 Ci Vi = Cf Vf   <=>  Vi = (Cf/Ci)*Vf  <=>  Vi = 9/12*8 = 6mL de NaCl QSP 8mL donc on rajoute 2mL d'eau déminéralisée

Ainsi pour la solution NaCl a 6‰ on prélève 4mL de la solution mère à l'aide d'une pipette graduée et 4 mL d'eau déminéralisée. De même que pour la solution NaCl a 3‰ on prélève mL de la solution mère Nacl à 12‰ et 6mL d'eau déminéralisée

Maintenant que nous avons nos différentes solutions, nous pouvons commencer la préparation de nos tubes à hémolyses que l'on va numéroter de 1 à 8 et dans lesquels on mettra 500μL de chaque solution à l'aide d'une micro pipette.

           Tube

• 1 : sérum physiologique
• 2 : NaCl 3 ‰
• 3 : NaCl 6 ‰
• 4 : NaCl 9 ‰
• 5 : NaCl 12 ‰
• 6 : Glucose 5,5%
• 7 : Urée
• 8 : Glycérol

Ensuite nous rajoutons à l'aide d'une pipette pasteur 2 gouttes de la suspension d'hématies dans chacun des 8 tubes a hémolyses. On homogénéise délicatement tous les tubes et on procède a la première observation  macroscopique. Si la solution est trouble, c'est que l'hémolyse n'a pas eu lieu alors que si la solution est rose et transparente comme du sang laqué, c'est que il y a eu hémolyse

Les résultats des observations sont reportés dans la partie « Résultats »

Nous procéderons ensuite a une observation microscopique de nos hématies et pour ce faire à l'aide d'une pipette pasteur on prélève une goutte de la solution que l'on dépose sur une lame et que l'on recouvre ensuite avec une lamelle. On fait cette opération pour chacun de nos 8 tubes à hémolyse.

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