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Compte rendue TP : Extraction de l’invertase à partir de la levure de boulangerie et étude de l’influence du pH sur l’activité enzymatique.

Guide pratique : Compte rendue TP : Extraction de l’invertase à partir de la levure de boulangerie et étude de l’influence du pH sur l’activité enzymatique.. Recherche parmi 248 000+ dissertations

Par   •  1 Mars 2018  •  Guide pratique  •  1 645 Mots (7 Pages)  •  9 296 Vues

Page 1 sur 7

                TP2         : Extraction de l’invertase à partir [pic 1]

                         de la levure de boulangerie et étude de

                        l’influence du pH sur l’activité enzymatique.

But :

  • Extraction de la fraction soluble de la levure de boulangerie
  • Etude l’effet du pH sur l’activité enzymatique à partir d’une culture de Saccharomyces cerevisiae.

Principe :

L’invertase ou β-fructosidase de la levure est une enzyme capable d’hydrolyser le saccharose en ses composants (Glucose et Fructose).

[pic 2]

L’activité enzymatique peut être étudiée en dosant les sucres réducteurs libérés après hydrolyse par une méthodes DNS (3,5 dinitrosalycilate ) en  milieu à fortement alcalin et à chaud, en présence de couleur rouge-orangé et absorber à 540nm .

Résultats et Discussion :

1 – Préparation de la gamme étalon :

1

2

3

4

5

6

Solution étalon glucose +fructose (mM) en ml

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

Eau distillée en ml

1

0,8

0,6

0,4

0,2

0

DNS en ml

1

1

1

1

1

1

Incuber pendant 5 minutes à 100°C

Eau distillée en ml

8

8

8

8

8

8

Lire les absorbances à 540nm

Tube

[glucose+ fructose] en mM =

Cf = (Ci.Vi)/Vf

Absorbance

1

(5*0)/9 = 0 g/L

0

2

(5*0,2)/9 = 0,11 g/L

0,204

3

(5*0,4)/9 = 0,22 g/L

0,355

4

(5*0,6)/9 = 0,33 g/L

0,443

5

(5*0,8)/9 = 0,44 g/L

0,565

6

(5*1)/9 = 0,55 g/L

0,768

[pic 3]

2 – Détermination de l’effet du pH sur l’activité enzymatique:

  • pH = 2

t=0 min

t=5 min

t=15 min

t=30 min

t=40 min

Blanc

0,18

0,26

0,32

0,37

0,42

Échantillon

0,24

0,32 (dilution 1/3)

0,36 (dilution 1/3)

0,47 (dilution 1/3)

0,52 (dilution 1/5)

  • pH= 4,5

t=0 min

t=5 min

t=15 min

t=30 min

t=40 min

Blanc

0,35

0,409

0,460

0,370

0,337

Échantillon

0,067

0,688 (dilution 1/3)

0,706 (dilution 1/4)

0,706 (dilution 1/7)

0,662 (dilution 1/10)

  • pH = 7

t=0 min

t=5 min

t=15 min

t=30 min

t=40 min

Blanc

0,054

0,062

0,116

0,23

0,47

Échantillon

0,70

0,78

0,82

0,92

0,98

D’après l’équation de la gamme d’étalon :

  •  y = 1,379 x donc  x = y / 1,379

Sachant que :     x = concentration de glucose+fructose en mM  et  y = Do

 pH = 2 :

  • Blanc

t  = 0 min                      x = y / 1,379 = 0. 18/ 1,379 = 0.13 mM[pic 4]

t=5 min                           x = y / 1,379 =0.26  / 1,379 = 0.188 mM[pic 5]

t= 15 min                        x = y / 1,379 =0.32 / 1,379 =0.232 mM[pic 6]

t=30 min                         x = y / 1,379 =0.37 / 1,379 = 0.268 mM[pic 7]

t=40 min                         x = y / 1,379 =0.42 / 1,379 = 0,304 Mm[pic 8]

  • Echantillon

t ₀ = 0 min                      x = y / 1,379 = 0. 24/ 1,379 = 0.174 mM[pic 9]

t=5 min                           x = y / 1,379 =0.32 / 1,379 = 0.23 mM[pic 10]

...

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