Chromatographie

Chapitre 5 biochimie

Différentes chromatographie

Phase fixe et molécules séparée dans une chromatographie.

Élution des molécules

Solution tampon = phase mobile

Chromatographie en phase liquide :

- A) Les chromatographies de partage

        - La chromatographie en partage CCM

        - La chromatographie d’exclusion

-B) Les chromatographie d’adsorption

        -La chromatographie sur échangeurs d’ions

        -La chromatographie d’affinité

Chromatographie sur couche mince :[pic 1]

Feuille d’aluminium sur laquelle se fixe de la silice (molécules polaires). Les molécules de vapeur d’eau se fixent sur la silice donc on déshydrate la plaque de silice.

Adsorbants:

Les adsorbants sont classés selon l'ordre croissant de leurs forces d'interactions avec des composés polaires.

Papier, cellulose Kieselguhr, terre de diatomées (roche sédimentaire siliceuse d'origine organique et fossile) Carbonate de sodium Oxyde de magnésium

Gel de silice

Alumine

Charbon activé

Lipides = pas tous polaires

→ leur degré de polarité permet une affinité plus ou moins importante avec la silice.

Pour séparer les molécules de la silice :

Utiliser des solvants plus ou moins polaires.

Phase mobile = solvant avec des polarités différentes.

+ une molécule est polaire + elle interagit avec la silice donc + il faudra un solvant polaire pour décrocher les molécules qui sont restées accrochées à la silice.[pic 2]

Lipide = caractérisé rapport frontal pour un solvant particulier

Révélation de la CCM

2) Chromatographie d’exclusion

[pic 3]

Billes (creuses) de même taille poreuse

Les tailles de pores sont choisie par l’expérimentateur

 [pic 4]

[pic 5]

Si la molécule ne rentre pas dans la bille, elles descendent et sortent dans les premiers tubes.

Il y en a qui mettent plus de temps à sortir car elles ont la possibilité de rentrer et sortir des billes.

Celles si sont éluées avec du retard.

Les grosses molécules sont exclues du gel = molécules d’exclusion

tube d’élution = tube dans lequel on récupère les échantillons.[pic 6]

Taille de pore = masse molaire d’exclusion (kDa) → caractéristique de la colonne d’exclusion

Toutes les molécules de masse molaire supérieure à la masse molaire de la colonne sont exclues du gel et excluée dans le volume mort.

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