TP sur les glucides

Présentation du TP

Bouteilles avec différentes lettres à reporter sur compte rendu et flacons pour dilutions. Regarder si le flacon a une solution limpide (est-ce que c’est du saccharose ?) ou trouble (est-ce que c’est de l’amidon ?).

On va avec des analyses déterminer la concentration et peut être la nature du glucide contenu dans le flacon.

Aperçu général

On va prendre notre bouteille et on va déterminer sa concentration approximative avec un refractomètre donc on aura sa concentration en Brix. On va préparer une solution intermédiaire que l’on va diluer appelée X1 et il faudra qu’elle soit à moins de 10g/L.

Ensuite si on a une solution limpide on va faire une hydrolyse acide à moins de 60°C et le seul produit qui peut s’hydrolyser est le saccharose donc on pourra répondre à la question est ce que c’est du saccharose ? On va appeler cette solution X0

Si la solution est trouble on va imaginer qu’on a à faire à un polysaccharide et donc on va faire une hydrolyse à l’alpha amylase et donc on va répondre à la question est ce que c’est de l’amidon ? On va appeler cette solution X2

Une fois les hydrolyse passées on ne saura pas si l’hydrolyse a eu lieu car la couleur de la solution ne permet pas de conclure sur cela.

Une fois qu’on aura fait ses différentes préparations on va passer au dosage proprement dit. On va doser les sucres réducteurs, les sucres totaux et mesurer le pouvoir rotatoire spécifique au polarimètre.

On va analyser les sucres réducteurs sur la solution X1 et X0 et X2. On va donc comparer le pouvoir réducteur avant et après hydrolyse pour voir si elle a vraiment eu lieu. Cela va nous donner 2 réponses différentes : une idée de la sensibilité à l’hydrolyse et le pouvoir réducteur de X brut.

Ensuite on va mesurer la concentration en sucre totaux et la comparaison des sucres réducteurs avec les sucres totaux va nous donner le dextrose équivalent. DE= SR/ST. T avec le dextrose équivalent on va déterminer le degré de polymérisation dp= 100/DE.

Le pouvoir rotatoire spécifique nous donne des indication sur la nature. On va mesurer un angle brut au polarimètre = angle spécifique * longueur du tube * concentration du produit. Donc on pourra déterminer le pouvoir rotatoire spécifique à partir de l’angle et de la concentration. La concentration qu’on va utiliser est celle qu’on a déterminer avec les brix.

1) Réfractomètre

Il faut vérifier que le 0 est bon avec de l’eau. Puis ensuite on pourra faire la mesure. 1 brix = 1g/100g de solution

1 brix environ égal à 10g/l

C’est une approximation est plus la concentration sera forte (100, 200g/L), plus l’approximation sera grande, plus on sera loin de la vérité. C’est une mesure rapide facile mais qui n’est pas parfaitement exacte.

2) Préparation d’une solution de concentration intermédiaire.

L’idée est d’avoir un facteur de dilution simple (2,4,5,10…). Cette solution il faut minimum 50ml et il faut la faire en fiole jaugée. Voir le prof si la concentration de la solution de départ est proche de 10g/L.

3) Réactions chimiques et enzymatiques

a) Inversion chimique : solution limpide

On va travailler en fioles, on va avoir notre solution à hydrolyse qui aura une concentration donnée et pour que la réaction d’hydrolyse acide soit totale en ¼ d’heure il faut qu’on ait une quantité de saccharose dans la solution inférieure à 50g/L. Il y a deux solutions, soit notre préparation est déjà à moins de 100G/L d’après les brix, à ce moment la on met dans la fiole de 100ml, 50ml de X et on rajoute à l’éprouvette 15ml d’HCl (sous la sorbonne) puis on complète à 100 avec de l’eau, la solution X aura donc été diluée 2 fois.

Si la solution a une concentration supérieure à 100g/L cas de l’exemple, il faut calculer combien on doit mettre de X pour que la concentration finale une fois l’eau ajoutée dans la fiole soit inférieure à 100g/L. On va diluer 5 fois, on met 20ml de solution dans la fiole.

A ce stade la on doit mesurer très précisément le volume de X et le trait de jauge de la fiole car ce qu’il faut connaitre précisément est le facteur de dilution. Le volume d’acide n’a pas besoin d’être très précis.

Une fois le mélange fait on va chauffer, on transvase le contenu de la fiole dans un erlenmeyer avec un barreau aimanté. Ensuite on va le placer au bain marie à 60° pendant 15 minutes, on le ferme avec du parafilm, puis après les 15 minutes on fait refroidir.

b) Hydrolyse à l’alpha-amylase si solution trouble

On part de la solution pré diluée, on la mélange avec de l’eau et une préparation d’enzyme. On va faire ca dans des petits tubes en plastiques, on mélange au vortex plus on laisse à 37°c au bain marie pendant 15 minutes. On para filme les tubes. Puis ensuite on fait refroidir.

4) Dosages colorimétriques

a) Dosage des sucres réducteurs : méthode au DNS

Pour doser les sucres réducteurs il va nous falloir une gamme étalon qu’on va faire avec du glucose. Il nous faut une solution mère en fiole, il en faut 50ml à 2,5 g/l de glucose. On va ensuite diluer cette solution et il faut que la gamme soit comprise entre 0,125 et 2,5 g/L. Il nous faut 6 points minimum. ON peut travailler en tubes à hémolyse avec 1 ml de volume total, il faut des points répartis uniformément sur la gamme étalon avec des facteurs

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