Purification du lysosome
Dissertation : Purification du lysosome. Recherche parmi 298 000+ dissertationsPar Nelyssia-Bazizi • 7 Mars 2022 • Dissertation • 790 Mots (4 Pages) • 199 Vues
TP : Purification du Lysozyme
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Table des matières
I/ But ............................................................................................................................................. 3
II/ Principes.................................................................................................................................... 3
1. Purification..................................................................................................................................... 3
2. Chromatographie échangeuse d’ions (Ion Exchange Chromatography) ....................................... 4
4. Limite de Linéarité ......................................................................................................................... 5
5. Dosage de Bradford ....................................................................................................................... 5
6. Game étalon .................................................................................................................................. 6
III/ Résultats .................................................................................................................................. 6
1. Calcul des tampons........................................................................................................................ 6
A. Tampon d’équilibration (250mL pH= 8,2) ................................................................................. 6
B. Tampon d’élution (40 mL pH 10,5)............................................................................................ 7
2. Activité enzymatique de Lysozyme commercial............................................................................ 7
3. Activité enzymatique des fractions obtenues après chromatographie......................................... 9
4. Dosage des protéines par le réactif de Bradford ......................................................................... 10
5. Tableaux des paramètres essentiels des fractions ...................................................................... 12
IV/ Discussion des résultats ..........................................................................................................14
1. Activité enzymatique de Lysozyme commercial.......................................................................... 14
2. Activité enzymatique des fractions obtenues après chromatographie....................................... 14
3. Dosage des protéines par le réactif de Bradford ......................................................................... 14
4. Pistes d’améliorations.................................................................................................................. 15
V/ Conclusions..............................................................................................................................15
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I/ But
Le but de ce TP est d’effectuer la purification du lysozyme contenu d’un blanc d’oeuf via une
chromatographie échangeuse de cations (CIAEX). Le lysozyme est une enzyme connue sous le nom
de mucopolypetide-N acétyl-muramylhydrolase découvert par Alexander Fleming en 1928 lors de
ces travaux sur le pénicillium. Elle est présente en grande quantité dans le blanc d’œuf où elle joue
un rôle bactéricide lors du développement embryonnaire. Cette enzyme hydrolyse la liaison β 1-4 du
peptidoglycane (hétéroside) qui constitue la paroi bactérienne.
Chaque fraction d’élution est soumise à un calcul d’activité enzymatique (AE).
L’activité enzymatique (AE) du lysozyme est calculée au spectrophotomètre pour chaque fraction
d’élution afin de contrôler la purification et déterminer la quantité d’enzyme présente. Les mesures
de l’AE des différentes fractions d’éluas sont comparées à une solution de lysozyme commercial afin
de s’assurer que les valeurs obtenues soient exploitables.
Un dosage au réactif de Bradford et une gamme étalon sont réalisé pour connaitre la quantité totale
de protéine élué au cours de la purification.
Des critères de purification (rendement, enrichissement, activité
...