La polarisation cellulaire

Expérience 1 :

Les microtubules et la centrosphère (Golgi + centrosome) sont cruciaux pour la polarisation

cellulaire lors de la migration. Leur orientation vers le front de migration permet le transport

polarisé de vésicules et la stabilisation des protrusions.

Figure 1 : On observe qu’au bout de 9 heures la surexpression de DAPK ou DAPK△CaM

(active) réduit la vitesse de migration, tandis que DAPK42A (dominant négatif) l'augmente.

Figure 2 : Les cellules exprimant DAPK/DAPK△CaM montrent une désorganisation des

microtubules et une absence de polarisation du Golgi/centrosome vers la blessure.

La DAPK inhibe la migration dirigée en perturbant la polarisation cellulaire et l'organisation

du cytosquelette.

Expérience 2 :

Cdc42 appartient à la famille des GTPases Rho.

Activation : Échange GDP/GTP par des GEF (Guanine Exchange Factors).

Désactivation : Hydrolyse du GTP en GDP via des GAP (GTPase-Activating Proteins).

Figure 3 : Les cellules DAPK/DAPK△CaM montrent une activation retardée/abolie de

Cdc42 après blessure.

La surexpression de Cdc42V12 (active) restaure la polarisation du Golgi (Fig4), confirmant

que la DAPK inhibe la migration via Cdc42.

La DAPK bloque l'activation de Cdc42 en réponse aux signaux migratoires.

Expérience 3 :

Ainsi, nous avons observé que l'intégrine β1 était préférentiellement activée au bord d'attaque

des cellules en migration, comme le montre la comparaison de la distribution de l'intégrine β1

totale avec celle de la β1 activée (Fig. 5 A). Curieusement, la DAPK était également localisée

au bord d'attaque des cellules en cours de migration pour cicatrisation (Fig. 5 A). La

surexpression de DAPK ou de DAPK∆CaM a atténué la signalisation en aval de l'intégrine au

bord d'attaque, comme le montre l'autophosphorylation de FAK (Fig. 5 B).

L'autophosphorylation de FAK au bord d'attaque a été sauvée par un prétraitement des

cellules exprimant DAPK ou DAPK∆CaM avec l'anticorps activateur de l'intégrine β1

TS2/16 (Fig. 5 B). Ainsi, ces résultats suggèrent non seulement l'existence d'une activité et

d'une signalisation polarisées de l'intégrine β1 dans les cellules au bord de la plaie, mais

révèlent également un rôle inhibiteur de DAPK dans ces événements

...