AP 3

AP n°4-5-5bis : Mécanisme de la duplication de l’ADN (2-3)

La réaction de polymérisation en chaîne (PCR) est fréquemment utilisée par les scientifiques pour reproduire en une infinité d’exemplaires différents génomes précis. Cette technique permet donc de distinguer la présence du pathogène qui sera multiplié encore et encore et donc, au final, reproduit en grande quantité.

Dans cette expérience nous allons devoir répondre à la question suivante : « L’enfant nouveau-né est-il atteint par le virus V ou est-il sain ? »

Pour répondre à cette question, nous allons donc devoir effectuer une PCR (Polymerase Chain Réaction) puis une électrophorèse avec les produits de cette PCR. En effet, la reproduction du génome viral permettra de le mettre en évidence. Ainsi nous pourrons savoir si l’enfant est atteint par le virus ou non par comparaison avec l’électrophorèse.

Nous avons ainsi suivi le protocole expérimental cuisine « PCR ». Nous avons fais 6 tours de Dénaturation/Hybridation/Elongation au milieu du protocole.

Nous faisions partie d’une des deux paillasses qui ne faisaient pas l’electrophorèse (AP n°5). Par contre, nous avons été chargé de réaliser la première partie de l’AP n°5 bis (mutation Ade2-).

Cette expérience que nous avons réalisé consistait à ensemencer des géloses afin que les levures que nous avons exposé avec des durées différents aux UV puissent pousser.

Les levures sont à la base mutées (Ade2-) : elles ne peuvent pousser dans un milieu sans Adénine. Si l’on apporte de l’Adénine au milieu, les cellules de la levure pourront vivre et se multiplier, mais la levure sera colorée en rouge.

Nous pourrons alors étudier l’action de l’agent mutagène (ici, UV) sur une population de cellules de levure mutée, en milieu avec Adénine. C’est pourquoi nous allons exposer les levures aux UV pendant différentes durées t=0 ; t=15 ; t=30 ; t=60 ; t=120 s afin de voir les différents effets de l’agent mutagène, s’il y en a.

Nous étions le seul groupe à être chargé de la réalisation de la « suspension B » de levure, indispensable pour la suite du TP. La suspension B contient 0,1 mL de la suspension A de levure avec 100 mL d’eau distillée, la suspension B est alors la suspension A diluée 1000 fois.

Nous avons ensuite suivi le protocole expérimental qui consistait à verser 0,1 mL de la suspension B réalisée précédemment sur une gélose, et 0,1 mL de la suspension A sur quatre autres géloses.

Nous avons évidemment travaillé en conditions stériles.

...