Fractionnement subcellulaire
TD : Fractionnement subcellulaire. Recherche parmi 298 000+ dissertationsPar Bgomez • 11 Octobre 2018 • TD • 1 480 Mots (6 Pages) • 853 Vues
Fractionnement subcellulaire
La fraction étudiée est la fraction contenant les microsomes. Le volume total de cette fraction est de 4.4 mL.
Dosage des protéines de la fraction
Résultats bruts
Résultats de la gamme de protéine
Nous avons passé la gamme d’étalonnage de BSA (0 à 5 mg) dans un spectrophotomètre à 540 nm.
Gamme étalon de BSA | |||||||
CBSA (mg/mL) | 0 | 0,5 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
A Essai 1 | 0 | 0,049 | 0,104 | 0,181 | 0,269 | 0,329 | 0,420 |
A Essai 2 | 0 | 0,102 | 0,134 | 0,212 | 0,299 | 0,378 | 0,446 |
A Essai 3 | 0 | 0,047 | 0,084 | 0,166 | 0,237 | 0,298 | 0,382 |
A Essai 4 | 0 | 0,024 | 0,052 | 0,150 | 0,228 | 0,305 | 0,357 |
A Moyenne | 0 | 0,055 | 0,093 | 0,177 | 0,258 | 0,327 | 0,401 |
A l’aide des résultats obtenus par spectrophotométrie, nous avons pu tracer la gamme d’étalonnage afin d’obtenir une équation pour calculer la quantité en protéines dans les différentes fractions.
[pic 1]
Equation :
y = 0,0793x + 0,0121
Absorbance = 0,0793 × Qprotéine + 0,0121
Qprotéine = [pic 2]
Résultats des fractions
Nous avons passé les différentes fractions dans un spectrophotomètre à 540 nm.
Fractions | Noyaux | Mitochondries | Microsomes | Ribosomes | ||||
Dilution | 1/4 | 1/2 | 1/4 | 1/2 | 1/2 | Pur | 1/2 | Pur |
A (540 nm) | 0,190 | 0,340 | 0,187 | 0,290 | 0,152 | 0,312 | 0,053 | 0,101 |
Calculs
Calcul quantité de protéine
A l’aide de l’équation obtenue à l’aide de la gamme d’étalonnage de la BSA, nous pouvons calculer la quantité en protéine dans chaque fraction.
Exemple de calcul à l’aide des résultats des microsomes (dilution ½) :
Qprotéine diluée = = = 1,764 mg[pic 3][pic 4]
Calcul concentration de protéine
Pour calculer la concentration en protéine, il faut que l’on multiplie la quantité de protéine diluée par la dilution et que l’on divise la quantité de protéine calculée par le volume de fraction que l’on a déposé dans la cuve.
Exemple de calcul à l’aide des résultats des microsomes (dilution ½) :
Qprotéine = Qprotéine diluée × dilution = 1,764 × 2 = 3,528 mg
Cprotéine = = = 35,284 mg/mL [pic 5][pic 6]
Calcul quantité totale de protéine
Pour calculer la quantité totale de protéine, il faut que l’on multiplie la concentration de protéine dans la cuve par le volume totale de la fraction.
Exemple de calcul à l’aide des résultats des microsomes (dilution ½) :
Qprotéine totale = Cprotéine × Vfraction totale = 35,284 × 4,4 = 155,248 mg
Résultats
Fractions | Noyaux | Mitochondries | Microsomes | Ribosomes | ||||
Qprotéine dilué (mg) | 2,243 | 4,135 | 2,206 | 3,504 | 1,764 | 3,782 | 0,516 | 1,121 |
Qprotéine (mg) | 8,974 | 8,270 | 8,822 | 7,009 | 3,528 | 1,032 | ||
Cprotéine (mg/mL) | 89,735 | 82,699 | 88,222 | 70,088 | 35,284 | 37,818 | 10,315 | 11,211 |
Qprotéine totale (mg) | 394,835 | 363,874 | 388,177 | 308,388 | 155,248 | 166,401 | 45,387 | 49,327 |
Qprotéine totale moyenne (mg) | 379,354 | 348,282 | 160,825 | 47,357 |
Mesure de l’activité de la Glucose-6-phosphatase dans la fraction
Résultats bruts
Résultats de la gamme d’étalonnage du phosphate
Nous avons passé la gamme d’étalonnage du phosphate (0 à 40 µg) dans un spectrophotomètre à 700 nm.
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