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Microscopie optique

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Par   •  30 Octobre 2025  •  Fiche  •  275 Mots (2 Pages)  •  23 Vues

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Microscopie optique

Résolution : 0,2 μm

Rien en dessous des bactéries (10-2 - 10-6)

Avantages : couleurs, cellules vivantes ou non, prépa rapide, grd pvr de pénétration de la lumière

Classique (histologique)

  • Cellules non-vivantes
  • Etude des tissus
  • Populaire à l’hôpital

A contraste de phase

  • Cellules vivantes ou non
  • Pas de colorant (blanc = vide, gris, noir = structure dense)
  • Observation proche de la réalité

Confocale

  • La plus développé (après ME)
  • Utilise laser et un photomultiplicateur (œil)
  • Permet construction image 3D

La préparation

Fixation de l’échantillon (préservation structure) > Déshydratation lente (remplacement de l’eau par un solvant) > Inclusion en paraffine (remplacement solvant par paraffine + congélation) > Coupe (semi finies) > Déparaffinage > Préparation complémentaire (couleur, …) > Observation

Marquage et coloration

  • Spécifique de structure : colorant

  • Spécifique de molécule :  

Protéines

ADN/ ARN

Anticorps : reconnaissance prot

  • Directe

Anticorps + molécule marqueur 🡪 liaison protéine cible

  • Indirecte

Anticorps 1 🡪 dans cellule 🡪 va vers la prot

Anticorps 2 + marqueur = spécifique anticorps 1

  • Méthode ++

Sonde nucléotidique (hybridation in situ) : FISH

  • Dénaturation de l’ADN (chauffe)
  • Insertion sonde complémentaire (fluo)
  • Perméabilisation cellule
  • Hybridation ADN/ sonde (froid)
  • Lavage

Gène de fusion

  • Création gène (fusion GFP et autre gène)
  • Transfection (intro gène dans génome)
  • Observation

Microscopie électronique

Flux e- 🡪 obtention de rayon X (ê sous vide, déshydraté, 1 semaine de prépa)

Cellule morte et pas entière

Pas de couleur

Observation jusqu’au virus (10-4 - 10-9)

ME à Transmission

  • Transmission d’électrons
  • Image : à l’intérieur de la cellule
  • Coupe : ultrafine

  • Virus rage = balle de fusil
  • Adénovirus = géométrique
  • Virus grippe = peu régulier
  • Rotavirus (gastro)

ME à balayage

  • Récupération d’e- (3D)
  • Image : en surface de la C
  • Coupe : pas ultra fine

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