Separation Arginine Et Alanine

 Remplir une colonne avec la résine IRC-50 dans une solution tampon acétate ( pH= 4,2).

 Chasser les bulles d’air en ouvrant le robinet de la colonne au maximum ( ne pas ramener le résine au sec).

 Préparer 16 tubes numérotés pour recueillir 5 ml de fractions d’éluant dans chaque tube.

 Déposer délicatement 0,5 ml du mélange d’acides aminés (alanine et arginine).

 Recueillir la première portion de l’éluant dans le tube 1

 Ajouter délicatement deux portion 0,5 ml du tampon acétate (pH= 4,2) et recueillir l’éluant dans le tube 2.

 Continuer l’élution avec 28 ml du tampon (pH= 4,2).

 Verser 5 ml de NaOH ( 1M) et recueillir l’éluant puis continuer l’élution avec 45 ml de NaOH.

 Recouvrir les tubes avec des pellicules de paraffine.

 Ajuster l’appareil de spectrophotomètre à 100% de transmittance avec un blanc (tube 1) après l’ajout de 1 ml de ninhydrine et 1 ml de tampon(pH= 5,5 )

 Ajouter dans les 15 tubes 1 ml de tampon ( pH= 5,5) et 1 ml de ninhydrine

 Porter les tubes au bain marie 20 minute puis refroidir et les placer dans l’obscurité 30 minute

 Passer les tubes au Vortex puis mesurer l’absorbance à 570 nm

...