Compte rendue TP : Extraction de l’invertase à partir de la levure de boulangerie et étude de l’influence du pH sur l’activité enzymatique.
Guide pratique : Compte rendue TP : Extraction de l’invertase à partir de la levure de boulangerie et étude de l’influence du pH sur l’activité enzymatique.. Recherche parmi 298 000+ dissertationsPar iheb_sghaier • 1 Mars 2018 • Guide pratique • 1 645 Mots (7 Pages) • 24 019 Vues
TP2 : Extraction de l’invertase à partir [pic 1]
de la levure de boulangerie et étude de
l’influence du pH sur l’activité enzymatique.
But :
- Extraction de la fraction soluble de la levure de boulangerie
- Etude l’effet du pH sur l’activité enzymatique à partir d’une culture de Saccharomyces cerevisiae.
Principe :
L’invertase ou β-fructosidase de la levure est une enzyme capable d’hydrolyser le saccharose en ses composants (Glucose et Fructose).
[pic 2]
L’activité enzymatique peut être étudiée en dosant les sucres réducteurs libérés après hydrolyse par une méthodes DNS (3,5 dinitrosalycilate ) en milieu à fortement alcalin et à chaud, en présence de couleur rouge-orangé et absorber à 540nm .
Résultats et Discussion :
1 – Préparation de la gamme étalon :
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |
Solution étalon glucose +fructose (mM) en ml | 0 | 0,2 | 0,4 | 0,6 | 0,8 | 1 |
Eau distillée en ml | 1 | 0,8 | 0,6 | 0,4 | 0,2 | 0 |
DNS en ml | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
Incuber pendant 5 minutes à 100°C | ||||||
Eau distillée en ml | 8 | 8 | 8 | 8 | 8 | 8 |
Lire les absorbances à 540nm |
Tube | [glucose+ fructose] en mM = Cf = (Ci.Vi)/Vf | Absorbance |
1 | (5*0)/9 = 0 g/L | 0 |
2 | (5*0,2)/9 = 0,11 g/L | 0,204 |
3 | (5*0,4)/9 = 0,22 g/L | 0,355 |
4 | (5*0,6)/9 = 0,33 g/L | 0,443 |
5 | (5*0,8)/9 = 0,44 g/L | 0,565 |
6 | (5*1)/9 = 0,55 g/L | 0,768 |
[pic 3]
2 – Détermination de l’effet du pH sur l’activité enzymatique:
- pH = 2
t=0 min | t=5 min | t=15 min | t=30 min | t=40 min | |
Blanc | 0,18 | 0,26 | 0,32 | 0,37 | 0,42 |
Échantillon | 0,24 | 0,32 (dilution 1/3) | 0,36 (dilution 1/3) | 0,47 (dilution 1/3) | 0,52 (dilution 1/5) |
- pH= 4,5
t=0 min | t=5 min | t=15 min | t=30 min | t=40 min | |
Blanc | 0,35 | 0,409 | 0,460 | 0,370 | 0,337 |
Échantillon | 0,067 | 0,688 (dilution 1/3) | 0,706 (dilution 1/4) | 0,706 (dilution 1/7) | 0,662 (dilution 1/10) |
- pH = 7
t=0 min | t=5 min | t=15 min | t=30 min | t=40 min | |
Blanc | 0,054 | 0,062 | 0,116 | 0,23 | 0,47 |
Échantillon | 0,70 | 0,78 | 0,82 | 0,92 | 0,98 |
D’après l’équation de la gamme d’étalon :
- y = 1,379 x donc x = y / 1,379
Sachant que : x = concentration de glucose+fructose en mM et y = Do
pH = 2 :
- Blanc
t = 0 min x = y / 1,379 = 0. 18/ 1,379 = 0.13 mM[pic 4]
t=5 min x = y / 1,379 =0.26 / 1,379 = 0.188 mM[pic 5]
t= 15 min x = y / 1,379 =0.32 / 1,379 =0.232 mM[pic 6]
t=30 min x = y / 1,379 =0.37 / 1,379 = 0.268 mM[pic 7]
t=40 min x = y / 1,379 =0.42 / 1,379 = 0,304 Mm[pic 8]
- Echantillon
t ₀ = 0 min x = y / 1,379 = 0. 24/ 1,379 = 0.174 mM[pic 9]
t=5 min x = y / 1,379 =0.32 / 1,379 = 0.23 mM[pic 10]
...