Ensemencement contrôlé d’une culture bactérienne

Ensemencement contrôlé d’une culture bactérienne

Matériel :

- spectrophotomètre + cuve

- milieu liquide

- préculture

- condition d’aseptie

- micropipette ou pipetus + cônes ou pipette (selon volume à prélever)

- incubateur

Méthode : Placer et ordonné le matériel + nettoyer la paillasse

- Allumer le spectro, le régler a 600 nm

- Vortexer votre préculture

- Prélever stérilement 1 ml de préculture et le mettre dans une cuve + Mesurer son

absorbance (la diluer si necessaire) afin de savoir quel volume il faut prélever pour

x ml de milieu liquide. Ex :

- Prélever le volume avec une micropipette ou un pipetus (cela dépendra du volume

à prélever

- Verser dans l’erlen contenant le milieu liquide.

- Incuber la culture dans un incubateur à 37°C avec une vitesse d’agitation de de 150

rpm (placer l’erlen délicatement afin d’éviter qu’il se casse)

L’Ensemencement de cette culture peut nous permettre de faire un suivi de croissance, dans

ce cas on prélèvera a un temps donné (ex : toutes les 45 min) un peu de préculture (bien

évidemment après chaque prélèvements, on remet les erlen dans l’incubateur et à chaque fois

que l’on veut prélever on sort lerlen de l’incubateur.

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