PHAGE M13

PHAGE M13

1-Généralités :

Le bactériophage M13 est un phage dont la forme libre est constituée d’une membrane entourant un ADN simple brin de 6,4 kilobases. Appelé brin (+) par convention. Cet ADN comprend 10 gènes (I à X) et 2 petites régions non codantes «inter géniques ». ce phage est recouvert de protéines, donnant un phage en forme de bâtonnet, dit « filamenteux ».

Figure : structure du phage M13.

2-MULTIPLICATION DE M13 « RF » :

• La transfection des bactéries par M13 et l’expression du virus dépendent de la présence d’un chromosome surnuméraire bactérien (épisome F) : la présence de cet épisome permet le cycle normal du phage : Il s’adsorbe à l’extrémité d’un pilus bactérien et après s’être débarrassé de sa protéine majeur de revêtement il pénètre via ce pilus bactérien dans la bactérie, Le brin (+) de DNA est complété par des enzymes bactériens en une forme double brin dite « replicative forme »

• Après plusieurs cycles de réplication 100 à 200 RF s’accumuleront dans la bactérie , la synthèse de DNA deviendra asymétrique , seule le brin (+) sera produit , il sera revêtue de protéines lors de l’expulsion à travers la membrane bactérienne

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• Lorsque l’épisome ne contient pas les gènes permettant ce cycle (épisome F’), l’ADN du phage s’incorpore sous la forme d’un ADN double brin capable d’exprimer les gènes qu’il contient ou qu’on a inséré dans sa structure, par exemple la β-galactosidase. Les bactéries avec l’épisome F’ sont des variétés commercialisées pour permettre l’expression des gènes clonés dans le phage M13.

FIGURE II : cycle du phage M13.

3-Modifications apportées au phage M13 :

Diverses modifications ont été apportées au phage M13 sauvage afin de produire un vecteur de clonage efficace

1- introduction d’un polylinker et suppression des sites préexistant

2- insertion d’un fragment de l’opéron lac et

α complémentarité

Le phage M13 existant sous la forme d’un ADN simple brin, il est possible d’y insérer des brins d’ADN d’un gène particulier présent à l’état hétérozygote chez l’homme : dans ce cas chaque phage ne peut insérer qu’un seul des deux allèles et les deux allèles se retrouvent dans des colonies séparées.

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