Technique biologique
Cours : Technique biologique. Recherche parmi 300 000+ dissertationsPar jaouadiamal • 18 Décembre 2017 • Cours • 4 516 Mots (19 Pages) • 562 Vues
Techniques biologiques.
Outils pour la Cytologie et l’histologie – Etude des principales techniques.
Quelques définitions.
- Cytologie : Etude microscopique de cellules isolées.
- Histologie : Etude microscopique de tissus biologiques. Par exemple, observation de l’oignon.
- Microscopie : « micro » = petit + « copie » = examiner.
On ne peut pas voir en-dessous de 1mm.
Quelques notions sur la vision.
- Vision humaine limitée par le pouvoir séparateur de l’œil.
- Pouvoir séparateur = capacité à séparer visuellement deux objets distincts.
- Pour une vision de 10/10 pouvoir séparateur = angle 1/60ème de degré.
Permet de distinguer deux points éloignés de 0,1 à 25cm.
- Pour une vision de 1/10ème
1mm vu à 25cm de distance.
Intérêt de la microscopie.
- Plus la distance d’observation est grande, plus les détails devront être grands pour pouvoir être observés : 1mm à 2,5m ; 1cm à 25cm, etc.
- Etude histologique à l’œil nu permet de distinguer :
- La couleur,
- La forme,
- La taille,
- L’aspect général.
- Etude microscopique viendra compléter : examen des cellules.
- L’utilisation d’appareils grossissants est donc intéressante.
- Loupes
- Observation à la loupe à main.
Loupe à main : Outil utilisé pour augmenter le pouvoir séparateur de l’œil.
- Composé d’une lentille biconvexe qui dévie les rayons lumineux.
- 10 x < Grossissement < 20 x (grossissement entre 10 et 20).
- Pour garder une trace de l’observation faite, utilisation d’un appareil photo possédant un objectif macro.
- Observation à la loupe binoculaire.
Loupe binoculaire : possède une lentille objectif près de l’objet à observer.
- Possède deux lentilles oculaires près des yeux.
- 10 x < Grossissement < 300x (grossissement entre 10 et 300).
- Pour garder une trace de l’observation faite, utilisation d’une binoculaire avec appareil photo.
- Utiles pour la réalisation de dissections fines. On peut y faire des dissections plus précises, rechercher des parasites sur le scarabée. etc.
- Observation le plus souvent de la surface des objets.
- Pour l’observation d’organismes peu pigmentés et transparents, possibilité d’observer l’extérieur et l’intérieur de l’individu. On peut essayer de voir l’intérieur d’organismes transparents, comme les larves de poissons, etc.
- Utilisation d’une lumière épiscopique ou diascopique.
Episcopique (épi = sur) : Permet d’observer des objets opaques en couleur en leur donnant un effet plus naturel.
Diascopique (dia = à travers) : Convient davantage à des échantillons translucides et transparents. Procure un meilleur contraste que l’épiscopique.
- Microscopie photonique.
Microscopie photonique = microscopie optique : Technique d’observation d’objets par l’utilisation d’un microscope dans lequel un faisceau de photons (de lumière) éclaire l’objet.
- Basé sur le même principe que la loupe binoculaire mais profondeur de champ plus faible.
- Grossissements plus importants que sur la loupe binoculaire (certains vont jusqu’à x 1 000).
Historique :
- Antiquité : utilisation de globes de verre remplis d’eau pour grossir les objets et concentrer sur eux la lumière.
- XIIIème siècle ; Elaboration de lentilles.
- 1590 : Hans et Zacharias Janssen (père et fils : opticiens hollandais) : 1er microscope ?
- 1609 ? Galilée (savant italien) : ochiolino : 1er microscope ?
- Fin du XVIème siècle : Antoni Van Leeuwenhoek : microscopes artisanaux simples d’usage et de taille réduite → intérêt des biologistes.
- Fin du XVIIème siècle : Christiaan Huygens (savant hollandais) : oculaire de Huygens qui corrige les aberrations chromatiques (amélioration de la couleur et de la netteté).
- Types de microscopes photoniques.
- Microscopie photonique simple.
- Même principe que loupe binoculaire.
- Grossissement plus important et moins de profondeur de champ.
- Eclairage essentiellement diascopique (sauf cas particulier).
- Objets observés par transparence → intérêt d’avoir des échantillons de petites tailles (épaisseur de l’ordre de quelques microns).
- Echantillons observés vivants ou morts.
- Echantillons observés colorés ou non.
- La manipulation des éléments regroupés suivants :
Permet l’observation
Permet de rendre l’image nette
Permet de rendre l’image plus ou moins lumineuse.
- L’ajout d’huile à immersion entre l’objet et l’objectif permet d’atteindre un grossissement 1 000.
- Microscopie à fluorescence.
- Microscope photonique à fluorescence = épifluorescence.
- Certains objets microscopiques sont fluorescents, c’est-à-dire qu’ils émettent sur une longueur d’onde pus courte (lambda = 200 à 300nm).
- Nécessite d’avoir un éclairage spécifique (avec de fortes quantité de bleu et de violet).
- Exemple : éclairage par un « brûleur » au Xénon ou brûleur HBO à vapeur de mercure.
- Eclairage épiscopique
- Lentille en quartz
- Grossissement x 200
- Quels types d’échantillons ?
- Composés naturellement fluorescents chlorophylle ou polymères.
- Ajout de marqueurs fluorescents (fluorochrome).
- Etc.
- Microscopie photonique à contraste de phase.
- Microscopie photonique à contraste de phase = microscope à interférence différentielle : largement utilisée pour l’observation de cellules vivantes.
- But : amplifier les contrastes naturels.
- Certaines régions des cellules apparaissent alors plus claires que d’autres → contrastes plus importants artificiellement
- Bon pour l’observation d’organismes avec flagelles et cils.
- Microscopie photonique à fond noir.
- Microscopie à fond noir.
- Observation de cellules vivantes grâce à une augmentation des contrastes naturels.
- Sont équipés d’une condenseur opaque qui ne laisse passer la lumière que de façon oblique sur l’objet.
- Seuls les rayons réfléchis par l’objet seront captés par l’objectif.
- Permet d’observer des objets dont la dimension est à la limite extrême du pouvoir séparateur et qui passeraient inaperçus avec des techniques ordinaires.
- On visualisera les éléments brillants sur fond noir.
- Problème : faible intensité lumineuse pour l’observateur.
- Préparation du matériel pour la microscopie photonique.
- Matériel vivant
- Préparation d’un matériel vivant différente d’une préparation d’une coupe histologique (protocole d’observation d’une matériel vivant plus simple).
Matériel vivant : Cellules isolées comme des frotis frais, des spermatozoïdes, du sang, des tissus végétaux, etc.
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