TP: Compte-rendu de Microbiologie

Année 2018/2019

Faculté des Sciences de Montpellier

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HLBI201

Compte-rendu des TP de Microbiologie

​Groupe 8D

Auteur :

• Rizoug Zeghlache Rym

L1 Portail MONOD – Sciences de la Vie

Introduction

La microbiologie est la science qui étudie les microorganismes (bactéries, archées, eucaryotes, protozoaires, virus) grâce à un microscope.

La microbiologie a des applications dans des domaines variés.

Dans le domaine médical la microbiologie va étudier les maladies infectieuses, dans le domaine thérapeutique elle servira à la recherche de nouveaux traitements par exemple. Elle a aussi des applications dans le domaine industriel, environnemental ou écologique, du génie génétique, de la transformation alimentaire.

Dans le but de déterminer les différents types de bactéries, leur milieu de vie ainsi que leur mode de nutrition et de respiration, nous avons réalisé des expériences lors des séances de travaux pratiques.

I/Etude d’un mélange bactérien:

Lors de la première manipulation, nous avons effectué l’observation d’un prélèvement pathologique à l’état frais et en réalisant une coloration de Gram sur le mélange bactérien.

L’état frais nous a permis d’observer des bactéries vivantes et mobiles.

Tandis que la coloration nous a permis de mettre en évidence la présence de bactéries Gram+ et Gram-.

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Dessin d’observation d’un mélange bactérien par coloration de Gram au microscope optique au grossissement x1000

Commentaire :

On observe différentes colonies bactériennes en fonction de leur forme et de leur couleur grâce à la ​coloration de Gram​.

La paroi des bactéries Gram + possède une épaisse couche de peptidoglycanes.

La paroi des Gram - possède une couche fine de peptidoglycanes et une membrane externe.

Dans la coloration, le ​violet de Gentiane​permet de colorer les bactéries Gram+et la fuchsine de Ziehl​permet de colorer les bactéries Gram-.

Sur la lame, on retrouve un très grand nombre de bactéries de forme sphérique (coques) de couleur violette et rose qui représentent les bactéries de type Gram+/Gram-.

On peut également observer des bacilles (forme en bâtonnet) de couleur rose ; seuls, associés par deux ou en palissade.

Les coques roses sont majoritairement associées par deux alors que

les coques violettes sont en grande partie regroupées et rassemblées en amas, certaines étaient isolées et d’autres liés en chaînette.

A partir du mélange bactérien, on a ensemencé 4 boîtes de Pétri contenant des milieux différents :

Un milieu non sélectif ​:

• GNO:​Gélose nutritive ordinaire

Des milieux sélectifs :

• Chapman​: Fortes concentrations en sel
• D-Coccosel​: Contient de l’esculine et de l’azide de sodium

• EMB:​À l’éosine et au bleu de méthylène

Description de ces types de colonies:

A l’aide du milieu Chapman, on sélectionne des germes halophiles. Le changement de couleur du milieu indique une diminution du pH lié à la consommation de mannitol et le rejet d’acides. Les colonies observées sont donc des cocci mannitol + halophiles.

Le milieu D-Coccosel permet un développement de cocci Gram +.

La coloration devient noirâtre si les bactéries utilisent esculine, ce qui n’est pas le cas ici.

Dans le milieu EMB, on retrouve uniquement des colonies d’entérobactéries qui sont des bacilles Gram-.

L’éosine est un indicateur de pH, la boîte ne changeant pas de couleur, les bactéries présentes sont basophiles.

On observe que les bactéries ont pris une coloration violet foncé ce qui indique qu’elles utilisent le lactose comme source de nutriment. Elles sont donc Lactose +.

Dans le milieu GNO, qui est un milieu non sélectif, on retrouve 2 types de colonies:

Afin de vérifier la pureté de nos colonies, nous avons réalisé une coloration de Gram sur les bactéries issues des milieux Chapman et EMB.

Dans le milieu Chapman on observe uniquement des coques en amas coloré en violet. La lame provenant du milieu EMB contient des bactéries fushia en forme de bâtonnets séparés et de coques.

II- Type respiratoire sur les bactéries Gram +:

Afin de pouvoir identifier des bactéries issues d’une culture donnée, leur aspect morphologique sera insuffisant pour pouvoir déterminer le nom de leur espèce, dans cette étape, on se basera sur leurs caractères biochimiques. Une des identifications clés sera de déterminer leur type respiratoire qui concerne plus précisément les coques Gram +.

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